三分钟解读 ELISA 实验原理

ELISA—酶联免疫吸附测定

 

酶联免疫吸附测定（enzyme linked immunosorbent assay，简写 ELISA 或 ELASA）指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙xi等固相载体上，利用抗原抗体特异性结合进行免疫反应的定性和定量检测方法。

 

该检测技术主要是用于对样品中的抗体、蛋白、细胞因子、激素等进行定量或定性检测。

 

ELISA 的基本原理

 

双抗夹心 ELISA 过程图

 

使抗原或抗体结合到某种固相载体表面（例如酶标板），并保持其免疫活性。将抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。

 

再将受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体发生反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅有无进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，故可极大地放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度。

 

ELISA 检测类型

 

在实际应用过程中，人们也根据具体情况灵活运用基础检测原理，研发出了多种 ELISA 检测类型，目前常见类型有：夹心法、直接法、间接法、竞争法。

 

夹心法：双抗体夹心法适用于测定二价或二价以上的大分子，但不适用于小分子抗原。将特异性抗体（捕捉抗体）与固相载体连接形成固相抗体。洗涤除去未结合的抗体及杂质后加入待检样品，样品中的特异性抗原与固相抗体结合，形成固相抗原抗体复合物。洗涤去除其他未结合物质。加入酶标抗体（检测抗体），固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合后彻底洗涤未结合的酶标抗体，加入底物反应显色。
 

双抗夹心法测抗体的反应模式与测抗原相似，用特异性抗原进行包被和制备酶结合物，以检测相应的抗体。

 

直接法：主要用于测定抗原。将抗原与固相载体连接，洗涤去除未结合的抗原及杂质。然后加酶标抗体，固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合后彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关，然后加入底物反应显色。

 

间接法：将抗原与固相载体相连结形成固相抗原。洗涤除去未结合的抗原及杂质。加入特异性一抗与固相抗原相结合形成固相抗原抗体复合物。洗涤后加入酶标二抗。固相免疫复合物中的抗体与酶标二抗结合，从而间接地标记上酶。洗涤后后加入底物反应显色。

 

竞争法：该方法通常用于检测小分子如半抗原、激素、药物等。待检游离抗原与固定于固相载体上的抗原一起竞争相同的有限量抗体，当样品中的游离抗原越多，可结合越多的抗体，而固相抗原只能结合较少的抗体。洗涤去除样品中的抗原与抗体的结合物，只留下固相抗原与抗体的结合物。

 

酶标板——常用于 ELISA 实验

 

安进特酶标板专用于各类 ELISA 实验，该板采用了医疗级聚苯乙xi材质，因蛋白质和聚苯乙xi表面间的疏水性部分能相互吸附，可溶性的抗原或抗体能有效结合到该固相载体上，保证实验的顺利进行。

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